Проліферативна активність епітеліоцитів слизової оболонки шлунка на тлі застосування кріоекстракту плаценти при диклофенак натрій-індукованій гастропатії у щурів

Abstract

Відомо, що ульцерогенний потенціал нестероїдних протизапальних засобів (НПЗЗ) опосередкований системною депресією синтезу простагландинів, які стимулюють процеси клітинної проліферації і фізіологічну регенерацію епітеліоцитів слизової оболонки шлунка (СОШ) і дванадцятипалої кишки (Циммерман Я.С., 2018). Тому одним з підходів до послаблення гастротоксичної дії НПЗЗ є зниження антипроліферативної дії останніх та відновлення репаративного потенціалу СОШ. Мета. Охарактеризувати влив диклофенак натрію (ДН) та його комбінації з кріоконсервованим екстрактом плаценти (КЕП) на проліферативну активність епітеліоцитів шлунка щурів. Матеріали та методи. Гостру ДН-індуковану гастропатію відтворювали шляхом одноразово внутрішньошлункового введення щурам ДН в дозі 50 мг/кг (УД50 = 48 мг/кг). Евтаназію тварин проводили через 24 год. після введення НПЗЗ. КЕП вводили внутрішньом’язово у профілактичному режимі застосування – 1 р/д впродовж 5 днів до введення ДН. Проліферативну активність клітин оцінювали за допомогою мишачих моноклональних антитіл до ядерного антигену Ki-67 («DAKO», клон MIB-1, Данія). Антитіло до Ki-67 наносили на зріз та виконували експозицію впродовж 1 год. на термостолі в умовах “водяної бані” при температурі 30,0 оС. Для візуалізації реакції антиген-антитіло застосовувалась полімерна система детекції EnVision anti-rabbit, DAKO, в якості хромогену використовувався діамінобензидин. Контрольне фарбування ядер виконувалось за допомогою гематоксиліну Майєра. Після кожного з етапів до фарбування діамінобензидином скельця зі зрізами промивали у трис-буфері з твіном рН 7,1 (BioOptica, Італія). Скельця фіксувались BioMaunt (BioOptica, Італія). Антитіла Кі-67 реагують з проліферуючими клітинами, які перебувають в G1, S, M, G2 стадіях клітинного циклу. Підраховували кількість Кі-67 позитивних клітин, загальну кількість клітин та розраховували індекс проліферації (ІП) за формулою: ІП = (кількість Кі-67 позитивних клітин / загальна кількість клітин в полі зору) × 100 %. Результати дослідження. Проведене імуногістохімічне дослідження показало, що на тлі розвитку ДН-індукованої гастропатії у щурів відмічено статистично вірогідне (р < 0,01) зниження проліферативної активності епітеліоцитів СОШ на 45,5 % відносно показників інтактних тварин, а ІП відповідно становив 0,06 %. Профілактичне застосування КЕП призвело до нівелювання актипроліферативної дії ДН на епітелій СОШ. Так ІП становив 0,10%, що статистично вірогідно (р < 0,001) на 40,0 % перевищувало показники щурів з ДН-індукованою гастропатією. Варто відзначити, шо введення КЕП інтактним щурам практично не впливало на проліферативну активність епітеліоцитів СОШ, шо вказує на відчутність у нього туморогенного потенціалу. Висновки. Встановлено, що профілактичне застосування кріоконсервованого екстракту плаценти здатне нівелювати антипроліферативну дію диклофенак натрію на слизову оболонку шлунка у щурів. На це вказувало зростання індексу проліферації за Кі-67 на 40,0 % відносно показників щурів з НПЗЗ-індукованою гастропатією.