Порівняльна характеристика нефротропної дії безклітинних кріоконсервованих біологічних засобів за показниками функціональної активності нирок на моделі активного аутоімунного нефриту

Abstract

Пошкодженням подоцитів, опосередковане антитілами проти антигенів подоцитів, які депонуються під гломерулярними вісцеральними епітеліальними клітинами отримало назву мембранозна нефропатія (МН) [1, 2]. Нашу увагу у якості інноваційних біотехнологічних препаратів для лікування МН, привернули безклітинні кріоконсервовані біологічні засоби (БКБЗ) – кріоконсервовані екстракти біологічних тканин, зокрема кріоекстракт селезінки – КЕС (як імунокомпетентного органа) та кріоекстракт плаценти – КЕП (як ключового регулятора внутрішньоутробного розвитку плоду) [3, 4]. Не меншої уваги вартують продукти культивування клітин – так звані кондиціоновані середовища (КС), зокрема КС, отримані з мезенхімальних стромальних клітин (КС-МСК) [5]. Мета дослідження. Провести порівняльну оцінку впливу КЕП, КЕС та КС-МСК на функціональний стан нирок при експериментальному аутоімунному нефриті Хеймана. Матеріали і методи. Експериментальні дослідження проведені на 42 шурах-самцях масою 200–220 г. Дослідження проведені у відповідності до Європейської конвенції про захист хребетних тварин, що використовуються для дослідних та інших наукових цілей» (м. Страсбург, 1986 р.). Аутоімунний нефрит (АІН) відтворювали за методикою Heymann W.R. та співав. [6] у модифікації шляхом введення щурам нефротропної антигенної суміші, яка складалась з повного ад’ювантра Фрейнда (Thermo Fisher Scientific, США) [7] та розчину антигену, отриманого з гомогенату алогенної тканини нирок у співвідношенні 1:1. На 70 день експерименту проводили оцінку функціонального стану нирок за умов спонтанного діурезу [8] – щурів утримували 24 год. у спеціальних обмінних клітках для збору сечі (добовий діурез, мл/1440 хв), після чого тварин виводили з експерименту та відбирали зразки крові. Вміст сечовини в крові визначали спектрофотометрично за реакцією аміаку з 2-оксоглутаратом за участю глутаматгідрогенази. Вміст креатиніну в крові визначали спектрофотометрично за реакцією пікратів з креатиніном. Швидкість клубочкової фільтрації (ШКФ) розраховували за методикою Besseling P.J. та співав. [9] (2021 р.) – при рівні креатиніну в плазмі крові ≥ 52 мкмоль/л: ШКФ (мкл /хв) = 5862 × маса тіла (г) 0,695 × концентрація креатиніну в плазмі крові (мкмоль/л) −1,150 × концентрація сечовини в плазмі крові (ммоль/л)−0,391. Тема науково-дослідної роботи (НДР). Робота виконана в рамках відомчої НДР кафедри інфекційних хвороб та клінічної імунології Харківського національного університету імені В.Н. Каразіна МОН України «Вивчення ролі імунних, автоімунних та метаболічних розладів у патогенезі та наслідках інфекційного процесу, що викликаний бактеріями, вірусами, вірусно-бактеріальними асоціаціями при гострому, затяжному та хронічному перебігу хвороби та удосконалення тактики лікування» (номер державної реєстрації 0123U105022, термін виконання: 2023–2028 рр., керівник – завідуюча кафедри інфекційних хвороб та клінічної імунології, к мед. н., доцент Волобуєва О.В.). Результати. Встановлено, що на 70 день експерименту у щурів а АІН відмічалось статистично вірогідне (р˂0,001) зниження об’єму добового діурезу на 47,2% відносно показників інтактних щурів, що становило 3,7±0,2 мл/добу. Біохімічні дослідження крові показали, що на тлі зниження добового діурезу у щурів з АІН відмічено статистично вірогідне (р˂0,001) зростання концентрації креатиніну на 111,3% та сечовини на 233,3% відносно показників інтактних щурів. На тлі застосування КЕП відмічалось зниження концентрації креатиніну в крові (р=0,01) на 16,8%. Застосування КЕС у щурів з АІН чинило співставні за виразністю з канефроном нефропротекторні властивості, на що вказувало статистично вірогідне (р=0,002) зростання ШКФ на 64,3% (551±43 мкл/хв) відносно показників щурів групи контролю. Найвиразніше відновлення функціонального стану нирок щурів встановлено на тлі застосування КС-МСК. Висновки. Дослідження показало, що досліджувані БКБЗ володіють нефропротекторною активністю на моделі нефриту Хеймана у щурів на що вказувало відновлення функціональної активності нирок, що підтверджувалось зростання ШКФ та зниженням концентрації креатиніну та сечовини у крові щурів з АІН. За виразністю нефропротекторного ефекту (за показниками ШКФ) досліджувані БКБЗ можна розташувати у наступній послідовності: КС-МСК (ШКФ: 856±59 мкл/хв)˃ КЕС (ШКФ: 551±43 мкл/хв) ˃ КЕП (ШКФ: 504±19 мкл/хв).